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文檔簡介
實驗六α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的檢測背景:酶在應用過程中存在的問題①天然酶對強酸、強堿、高溫等敏感,易失活②難回收,提高了生產成本③反應后酶混在產物中,影響產品質量
將水溶性的酶用物理或化學的方法固定在某種介質上,使之成為不溶于水而又有酶活性的制劑。固定化酶基礎知識:酶的固定化技術酶固定化的方法:a、吸附法:將酶吸附到固體吸附劑表面的方法,如:活性碳、多孔玻璃、石英砂等固體吸附劑酶d、包埋法:將酶包裹在凝膠交聯后的格子中c、交聯法:b、共價偶聯法酶的某些基團(如氨基末端、羧基末端)與載體共價結合。利用試劑與酶之間發生分子交聯來把酶固定化的方法。a、吸附法:實驗六α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的檢測實驗目的:1.掌握α-淀粉酶的固定化2.檢測固定化α-淀粉酶的效果實驗設備和材料:38頁—39頁固定化酶柱氣門心夾子5ml注射器1.α-淀粉酶的固定化吸附5mgα-淀粉酶+4ml蒸餾水+5g石英砂,攪拌30min裝入下端接有氣門心并用夾子封住的注射器中
用10倍柱體積的蒸餾水洗滌除去游離淀粉酶(1mL/min)裝柱洗柱如何證明淀粉酶已全部被固定?蒸餾水洗柱流出的水+淀粉,保溫幾分鐘后+KI-I2變藍說明水中無游離的淀粉酶,已全部固定固定化裝置—反應柱淀粉α-淀粉酶糊精β-淀粉酶葡萄糖糖化淀粉酶麥芽糖遇碘顯藍色紅色實驗原理:2、淀粉水解的檢測一定濃度的淀粉流經固定化酶柱后,可使淀粉水解成糊精,流出物用KI-I2溶液測試呈紅色。枯草桿菌的α-淀粉酶:最適溫度為50-75℃;最適PH為5.5-7.5溶解淀粉50mg淀粉溶于100ml熱水中,攪拌均勻過柱使淀粉溶液以0.3ml/min的流速過柱,在流出5ml淀粉后接收0.5ml流出液。檢測加入1-2滴KI-I2溶液,觀察顏色變化。用水稀釋1倍后再觀察顏色。保存及再次使用10倍柱體積蒸餾水洗滌此柱,放置4℃冰箱保存,幾天后取出重復實驗。實驗步驟:
讓淀粉和固定的α-淀粉酶充分反應2.3實驗結果12341、水+1~2滴KI-I2溶液、淀粉液+1~2滴KI-I2溶液、流出液+1~2滴KI-I2溶液、稀釋1倍的流出液+1~2滴KI-I2溶液類型優點不足直接使用酶催化效率高,低耗能、低污染等容易失活;很難回收,提高生產成本;酶會混在產物中,可能影響產品質量固定化酶易與產物分離、反復利用一種酶只能催化一種化學反應,而在生產實踐中,很多產物的形成都通過一系列的酶促反應才能得到的直接使用酶和固定化酶的優缺點有些生物無性別,如大部分植物(雌雄同株);有性別的生物大部分由性染色體決定性別XY型(雌性為同型的XX,雄性為異型的XY)ZW型(雄性為同型的ZZ,雌性為異型的ZW)有些生物X比Y大,有些生物Y比X大果蠅9.1、將從大腸桿菌得到的磷酸三酯酶固定到尼龍膜上制成制劑,可以用來降解殘留在土壤中的有機磷農藥,與用微生物降解相比,其作用不需要適宜的()A、溫度B、PHC、水分D、營養D習題鞏固2.某一實驗小組的同學,欲通過制備固定化酵母細胞進行葡萄糖溶液發酵實驗,實驗材料及用具齊全。(2)該實驗小組用如圖所示的裝置來進行葡萄糖發酵①圖中a為固定化酵母;b是反應柱。②從上端漏斗中加入反應液的濃度不能過高的原因是:
。③為使該實驗中所用到的固定化酵母細胞可反
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