第5章 病理組織切片常規(guī)染色

病理檢驗(yàn)技術(shù)

病理組織切片常規(guī)染色高職高專醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)系列教材目

錄第一節(jié)病理切片染色概述01第二節(jié)蘇木精-伊紅染色02學(xué)習(xí)目標(biāo)知識(shí)目標(biāo)能力目標(biāo)素質(zhì)目標(biāo)

樹(shù)立良好的醫(yī)德醫(yī)風(fēng)和科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)能夠獨(dú)立配置蘇木精-伊紅染色液，獨(dú)立完成HE染色掌握常用染色術(shù)語(yǔ)的含義，掌握蘇木精-伊紅染色第一節(jié)

病理切片染色概述一、染色的目的

它的主要目的是增強(qiáng)組織中各種成分在光學(xué)顯微鏡下的可見(jiàn)性和辨識(shí)度。當(dāng)病理組織標(biāo)本被制作成切片后，需要通過(guò)特定的染色劑進(jìn)行處理。這些染料能夠選擇性地與目標(biāo)組織或細(xì)胞成分結(jié)合，使它們呈現(xiàn)出特定的色彩。這些色彩的變化不僅使組織和細(xì)胞成分更加鮮明可見(jiàn)，更重要的是，它們改變了組織和細(xì)胞的折射率，使得在顯微鏡下觀察時(shí)，各種組織結(jié)構(gòu)的界限更加清晰，極大地促進(jìn)了我們對(duì)組織結(jié)構(gòu)和病變的深入理解和準(zhǔn)確診斷。二、染色機(jī)制

染色，作為一個(gè)將染色劑與組織細(xì)胞緊密結(jié)合的過(guò)程，其背后的反應(yīng)機(jī)制顯得尤為復(fù)雜，且至今科學(xué)家們?nèi)栽谂μ剿髌渫暾?xì)節(jié)。當(dāng)前，學(xué)術(shù)界普遍認(rèn)為，這一反應(yīng)過(guò)程不僅涉及了深層次的化學(xué)作用，同時(shí)也涵蓋了物理作用的參與。換句話說(shuō)，組織細(xì)胞的染色效果，實(shí)際上是這兩種作用共同交織、協(xié)同作用的結(jié)果。這種綜合作用的機(jī)制，為我們理解和應(yīng)用染色技術(shù)在醫(yī)學(xué)、生物學(xué)等領(lǐng)域提供了重要的基礎(chǔ)。(一)染色的物理作用1.滲透作用

組織具有許多微小的孔隙，染料通過(guò)滲透進(jìn)入組織，它并非與組織牢固地結(jié)合，而是通過(guò)簡(jiǎn)單的物理過(guò)程進(jìn)入。這可以被視為染料與組織之間的簡(jiǎn)單物理交互，類似于混合過(guò)程。2.吸附作用

吸附作用是指一種物質(zhì)從其周圍將另一種物質(zhì)的分子、原子或離子集中到界面上的過(guò)程。3.吸收作用

又稱溶解作用。組織吸收染料并形成牢固的結(jié)合。(二)染色的化學(xué)作用三、常用染色劑

(一)染色劑的性質(zhì)染色劑又稱染料，染色劑又稱染料，是一類有色的無(wú)機(jī)或有機(jī)化合物。在組織學(xué)染色中常用的染料主要為含有苯環(huán)和雜環(huán)的有機(jī)化合物。

1.發(fā)色團(tuán)

也稱為色原，是染料分子中能夠產(chǎn)生顏色的基團(tuán)。2.助色團(tuán)

助色團(tuán)是染料分子中的一種基團(tuán)，它能夠與發(fā)色團(tuán)產(chǎn)生電離并形成鹽類，從而加深染料分子的顏色，并與被染物質(zhì)分子形成親和力。三、常用染色劑(二)染色劑的分類1.按染色劑的來(lái)源分類(1)天然染料；(2)人工合成染料；(3)無(wú)機(jī)化合物2.按染色劑的化學(xué)反應(yīng)分類(1)堿性染料；(2)酸性染料；(3)中性染料3.按染料的主要用途分類(1)細(xì)胞染料；(2)組織染料四、常用染色術(shù)語(yǔ)1.普通染色2.特殊染色3.單一染色4.復(fù)染色5.多種染色6.直接染色、間接染色7.媒染劑、促染劑、分化劑8.異染性染色9.藍(lán)化

五、染色方法的分類

1.按染色的手段分類2.按染色對(duì)象的成分分類3.按染色對(duì)象的種類分類

六、進(jìn)行性染色與退行性染色

(一)進(jìn)行性染色

進(jìn)行性染色是一種逐漸加深染色的方法，從淺到深地染色組織成分，直至達(dá)到所需的染色強(qiáng)度為止。在這種方法中，通常使用較低濃度的染料溶液，以獲得適當(dāng)?shù)娜旧Ч?。在染色過(guò)程中，需要不斷在顯微鏡下觀察樣品，以控制染色的程度，避免過(guò)度染色。相比于其他方法，進(jìn)行性染色不需要使用鹽酸乙醇等分化劑。(二)退行性染色

退行性染色的特點(diǎn)是先使組織過(guò)度染色，超過(guò)所需的程度，然后再使用某些溶液（如鹽酸乙醇）來(lái)去除過(guò)多的染色劑，最終達(dá)到適當(dāng)?shù)娜旧疃?同時(shí)使不應(yīng)著色的組織細(xì)胞脫色，這個(gè)脫色步驟被稱為“分化”。在分化過(guò)程中，通過(guò)顯微鏡下的觀察來(lái)控制染色的程度是必不可少的。HE染色中用蘇木精染細(xì)胞核多用退行性染色。第二節(jié)

蘇木精-伊紅染色蘇木精(Hematoxylin)和伊紅(Eosin)染色，簡(jiǎn)稱HE染色，是組織學(xué)、病理學(xué)最廣泛應(yīng)用的基本染色方法，也被稱為常規(guī)染色。HE染色主要用于顯示各種組織和病變的一般形態(tài)結(jié)構(gòu)，可以進(jìn)行全面的觀察。因此，在病理診斷、教學(xué)和科研方面都具有重要的價(jià)值。一、染色的原理

(一)蘇木精染色的基本原理

通常，蘇木精被稱為堿性染料，因?yàn)樗趬A性條件下呈現(xiàn)出藍(lán)色。但實(shí)際上，蘇木精本身并不是堿性染料，而是一種前體物質(zhì)。在氧化的過(guò)程中，蘇木精轉(zhuǎn)變?yōu)樗嵝匀玖咸K木紅。當(dāng)蘇木紅與鋁結(jié)合時(shí)，形成一種帶正電荷的藍(lán)色色精。只有這種藍(lán)色色精在堿性條件下才表現(xiàn)出堿性。細(xì)胞核的染色質(zhì)主要由DNA組成，DNA的磷酸基在雙螺旋結(jié)構(gòu)中呈現(xiàn)負(fù)電荷，因此具有酸性。在染色過(guò)程中，帶負(fù)電荷的細(xì)胞核與帶正電荷的藍(lán)色色精通過(guò)離子鍵或氫鍵結(jié)合，從而完成染色。因此，蘇木精在堿性溶液中呈現(xiàn)出藍(lán)色，使細(xì)胞核染成藍(lán)色。一、染色的原理

(二)伊紅染色的基本原理

伊紅Y是一種化學(xué)合成的酸性染料，在水中會(huì)離解成帶負(fù)電荷的陰離子。細(xì)胞質(zhì)內(nèi)主要成分是蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)是一種兩性化合物，在其等電點(diǎn)(pH4.7～5.0)時(shí)，不表現(xiàn)出電性。在這種情況下，酸性或堿性染料很難染色細(xì)胞質(zhì)。當(dāng)pH調(diào)至6.7～6.8時(shí)，高于蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)，蛋白質(zhì)呈酸式電離，此時(shí)帶負(fù)電荷的陰離子就能被帶正電荷的染料染色，同時(shí)也會(huì)染色胞核，造成胞核和胞質(zhì)難以區(qū)分。為了解決這個(gè)問(wèn)題，需要將pH調(diào)至低于細(xì)胞質(zhì)的等電點(diǎn)，這樣細(xì)胞質(zhì)中的蛋白質(zhì)就會(huì)帶正電荷(陽(yáng)離子)，從而可以被帶負(fù)電荷的伊紅染料染色。通常情況下，細(xì)胞質(zhì)、紅細(xì)胞和結(jié)締組織會(huì)被伊紅染成紅色或粉紅色，與被蘇木精染成藍(lán)色的細(xì)胞核形成鮮明對(duì)比。二、染液的配制

(一)蘇木精液1.Harris蘇木精液，最常用；2.Ehrlich蘇木精液的配制；3.Gi11改良蘇木精液的配制4.Mayer改良蘇木精液的配制(二)分化液(三)氫氧化氨液藍(lán)化液(四)伊紅染液三、染色的程序

蘇木精伊紅染色簡(jiǎn)稱HE染色，是組織學(xué)技術(shù)中常用的標(biāo)準(zhǔn)染色方法。在優(yōu)質(zhì)的HE染色切片中，紅色和藍(lán)色相互映襯，層次清晰，色彩濃淡均勻。(一)常規(guī)石蠟切片HE染色1.脫蠟至水2.染色3.脫水、透明4.封固(二)冷凍切片HE染色(三)快速石蠟切片染色四、染色的結(jié)果

HE染色是一種常規(guī)染色方法，能夠使細(xì)胞核呈現(xiàn)出鮮明的藍(lán)色，軟骨基質(zhì)和鈣鹽顆粒染成深藍(lán)色，黏液染成灰藍(lán)色。同時(shí)，細(xì)胞質(zhì)被伊紅染成淡紅色，膠原纖維呈淡粉紅色，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的嗜酸性顆粒呈鮮紅色，而紅細(xì)胞呈橘紅色。在優(yōu)質(zhì)的HE染色切片中，細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)呈現(xiàn)出藍(lán)色和紅色相映，色彩鮮艷美麗。胞核清晰可見(jiàn)，核膜和核染色質(zhì)顆粒也十分清晰。此染色方法能夠展示組織或細(xì)胞的一般形態(tài)和多種物質(zhì)成分，并且能夠長(zhǎng)期保存而不褪色。